ⅠNucleic acidiifihan
Nucleic acid ti pin si deoxyribonucleic acid (DNA) ati ribonucleic acid (RNA), laarin eyiti RNA ti pin si ribosomal RNA (rRNA), ojiṣẹ RNA (mRNA) ati gbigbe RNA (tRNA) ni ibamu si awọn iṣẹ oriṣiriṣi rẹ.DNA wa ni ogidi ni arin, mitochondria ati chloroform, nigba ti RNA wa ni o kun pin ninu awọn cytoplasm.Gẹgẹbi ipilẹ ohun elo ti ikosile jiini, isediwon acid nucleic ṣe ipa pataki pupọ ninu iwadii isedale molikula ati iwadii molikula ile-iwosan.Idojukọ ati mimọ ti isediwon acid nucleic yoo ni ipa taara PCR ti o tẹle, ilana ilana, iṣelọpọ fekito, tito nkan lẹsẹsẹ enzymu ati awọn adanwo miiran.
Ⅱ Nucleic acid isediwon ati ọna ìwẹnumọ
① Ọna isediwon Phenol/chloroform
Phenol/chloroform isediwon ni a kilasika ọna fun DNA isediwon, eyi ti o kun nlo meji o yatọ si Organic olomi lati toju awọn ayẹwo, itu DNA orisun nucleic acid ni omi ipele, lipids ni Organic alakoso, ati awọn ọlọjẹ laarin awọn meji ipele.Ọna yii ni awọn anfani ti iye owo kekere, mimọ giga ati ipa ti o dara.Awọn alailanfani jẹ iṣẹ idiju ati igba pipẹ.
② Ọna Trizol
Ọna Trizol jẹ ọna kilasika fun isediwon RNA.Ọna Trizol ti pin si apakan olomi ati apakan Organic lẹhin centrifugation pẹlu chloroform, ninu eyiti RNA ti wa ni tituka ni ipele olomi, a ti gbe ipele olomi lọ si tube EP tuntun kan, ojoriro ti gba lẹhin fifi isopropanol kun, ati lẹhinna isọdọtun ethanol.Ọna yii dara fun isediwon RNA lati awọn ẹran ara ẹranko, awọn sẹẹli ati awọn kokoro arun.
③ Ọna ìwẹnumọ ọwọn Centrifugal
Centrifuge iwe ìwẹnumọ ọna le adsorb DNA pataki nipasẹ pataki ohun alumọni matrix adsorption ohun elo, nigba ti RNA ati amuaradagba le ṣe laisiyonu, ati ki o si lo ga iyo kekere PH lati darapo nucleic acid, kekere iyọ ga PH iye elution lati ya ati ki o purify nucleic acid.Awọn anfani jẹ ifọkansi iwẹnumọ giga, iduroṣinṣin giga, ko si iwulo fun ohun elo Organic, ati idiyele kekere.Aila-nfani ni pe o nilo lati wa ni centrifuged ni igbese nipa igbese, awọn igbesẹ iṣiṣẹ diẹ sii.
④ Ona awọn ilẹkẹ oofa
Ọna awọn ilẹkẹ oofa ni lati pin ayẹwo sẹẹli sẹẹli nipasẹ lysate, tu silẹ acid nucleic ninu apẹẹrẹ, ati lẹhinna awọn ohun elo acid nucleic ti wa ni ipolowo ni pato lori dada ti ilẹkẹ oofa, lakoko ti awọn idoti gẹgẹbi awọn ọlọjẹ ati awọn suga wa ni osi sinu. olomi naa.Nipasẹ awọn igbesẹ ti pipin sẹẹli sẹẹli, isunmọ ilẹkẹ oofa pẹlu acid nucleic, fifọ acid nucleic, elution acid nucleic, ati bẹbẹ lọ, acid nucleic funfun ni a gba nikẹhin.Awọn anfani jẹ iṣẹ ti o rọrun ati lilo akoko kukuru, laisi iwulo centrifugation igbesẹ.O ni awọn ibeere imọ-ẹrọ kekere ati pe o le mọ adaṣe ati iṣiṣẹ pupọ.Apapọ kan pato ti ileke oofa ati acid nucleic jẹ ki acid nucleic ti a fa jade pẹlu ifọkansi giga ati mimọ.Alailanfani ni pe idiyele ọja lọwọlọwọ jẹ gbowolori diẹ.
⑤ Awọn ọna miiran
Ni afikun si awọn ọna mẹrin ti o wa loke, awọn gbigbona wa, ọna iyọ ti o ni idojukọ, ọna idọti anionic, ọna ultrasonic ati ọna enzymatic, bbl
Ⅲ Iru isediwon acid nucleic
Foregene ni Syeed PCR Taara ti agbaye ti o ni idari, pẹpẹ ipinya RNA meji-iwe (DNA-nikan + RNA nikan).Awọn ọja akọkọ pẹlu awọn ohun elo ipinya DNA/RNA, PCR ati taara PCR reagents jara reagents lab molikula.
① Lapapọ isediwon RNA
Lapapọ awọn ayẹwo isediwon RNA pẹlu ẹjẹ, awọn sẹẹli, awọn ẹran ara ẹranko, awọn ohun ọgbin, awọn ọlọjẹ, ati bẹbẹ lọ Iwa mimọ giga ati ifọkansi giga ti lapapọ RNA le ṣee gba nipasẹ isediwon RNA lapapọ, eyiti o le ṣee lo ni RT-PCR, itupalẹ chirún, itumọ in vitro, molecular cloning, Dot Blot ati awọn miiran adanwo.
Foregene jẹmọAwọn ohun elo Ipinya RNA
Animal Total RNA ipinya Apo--Ni kiakia ati daradara jade ni mimọ-giga ati didara lapapọ RNA lati ọpọlọpọ awọn ẹran ara ẹranko.
Cell Total RNA ipinya Apo--RNA ti a sọ di mimọ ati didara ga ni a le gba lati oriṣiriṣi awọn sẹẹli ti o gbin ni iṣẹju 11.
Ohun ọgbin Total RNA ipinya Apo--Ni kiakia jade RNA lapapọ didara giga lati awọn ayẹwo ọgbin pẹlu polysaccharide kekere ati akoonu polyphenol.
Gbogun ti RNA Ipinya Apo- Ni kiakia ya sọtọ ati sọ RNA gbogun ti di mimọ lati awọn ayẹwo bii pilasima, omi ara, awọn fifa ara ti ko ni sẹẹli ati awọn alabojuto aṣa sẹẹli.
② Iyọkuro DNA Genomic
Awọn ayẹwo isediwon DNA genomic pẹlu ile, feces, ẹjẹ, awọn sẹẹli, awọn ẹran ara ẹranko, awọn ohun ọgbin, awọn ọlọjẹ, bbl -throughput lesese ati awọn miiran adanwo.
Foregene jẹmọAwọn ohun elo Iyasọtọ DNA
Animal Tissue DNA Ipinya Apo- Iyọkuro ni iyara ati isọdi ti DNA genomic lati awọn orisun pupọ, gẹgẹbi awọn ẹran ara ẹranko, awọn sẹẹli, ati bẹbẹ lọ.
Apo DNA Midi Ẹjẹ (1-5ml)- Ni kiakia wẹ DNA jinomiki ti o ni agbara giga lati inu ẹjẹ anticoagulated (1-5ml).
Buccal Swab/FTA Kaadi DNA ipinya Apo- Ni kiakia wẹ DNA jinomiki ti o ni agbara giga lati awọn ayẹwo buccal swab/FTA Card.
Ohun ọgbin Iyapa DNA- Ni kiakia sọ di mimọ ati gba DNA jiini ti o ga julọ lati awọn ayẹwo ọgbin (pẹlu awọn polysaccharides ati awọn apẹẹrẹ ọgbin polyphenol)
③ Iyọkuro Plasmid
Plasmid jẹ iru DNA moleku kekere ti o ni iyipo ninu awọn sẹẹli, eyiti o jẹ apanirun ti o wọpọ fun isọdọtun DNA.Ọna ti isediwon plasmid ni lati yọ RNA kuro, plasmid lọtọ lati inu DNA genomic bacterial, ati yọ amuaradagba ati awọn aimọ miiran kuro lati gba plasmid mimọ.
Gbogbogbo Plasmid Mini Apo- Ni kiakia wẹ DNA plasmid ti o ga julọ lati awọn kokoro arun ti o yipada fun awọn adanwo isedale molikula deede gẹgẹbi iyipada ati tito nkan lẹsẹsẹ enzymu
④ Awọn iru isediwon miiran, isediwon miRNA, ati bẹbẹ lọ.
Apo Ipinya miRNA eranko- Ni kiakia ati daradara jade awọn ajẹkù RNA kekere ti 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA lati ọpọlọpọ awọn ẹran ara ẹranko ati awọn sẹẹli
Ⅳ Awọn ibeere fun isediwon acid nucleic ati abajade mimọs
① Lati rii daju iduroṣinṣin ti ipilẹ akọkọ ti acid nucleic.
② Din kikọlu ti awọn ọlọjẹ, sugars, lipids ati awọn miiran macromolecules
③ Ko yẹ ki o jẹ ohun elo Organic tabi ifọkansi giga ti awọn ions irin ti o le ṣe idiwọ henensiamu ninu awọn ayẹwo acid nucleic.
④ RNA ati idoti nucleic acid miiran yẹ ki o yọkuro nigbati o ba n jade DNA, ati ni idakeji.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu kọkanla-24-2022
